생리생화학실험실

Gene cloning의 2단계 - 얻은 유전자를 vector에
삽입한다


자, 이제까지 한 것은 PCR을 통해서 gene cloning의 1단계인 "원하는 유전자를
얻어낸다"였습니다. 만약에 PCR product를 얻어서 단순하게 DNA 염기서열만을 확인하고 싶다면 굳이 cloning의 나머지 단계를 거칠
필요는 없습니다. PCR product를 정제하여 DNA sequencing을 하기만 하면 됩니다. 이런 경우는 cloning을 거치지 않고
바로 sequencing한다고 하여 "direct sequencing"이라는 용어를 씁니다.
다만 이 강의에서는 여러분들에게 gene
cloning의 각 단계를 설명하고 그 과정에서 여러 가지 지식과 실험 방법을 소개하고자 하는 것이므로, PCR product를 이용하여
gene cloning 과정을 거치는 디자인을 적용할 것입니다. 실제로 direct sequencing에 비하여 이렇게 cloning하여
sequencing하는 것이 유리할 때도 있습니다.

이제부터 볼 것은 다음과 같은 과정들입니다.

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이 과정에서는 다음과 같은 것에 대한 설명이 있을 것입니다.

- Vector란 무엇이며 어떤 역할을 하는가
- DNA ligation이란 무엇인가
- 제한효소(restriction
enzyme)를 이용한 DNA ligation
- PCR product를 cloning할 때는 어떤 방법을 쓰는가

제가 처음에 말씀드리길, gene cloning을 공부하면 분자생물학 실험 기법 중의 많은 것을 이해할 수 있게 된다고
말씀드렸습니다.
바로 여기, 2단계에서 나오는 이론과 방법들이 거기에 속합니다. 이 부분을 공부하시면 아래처럼 됩니다.

1) 분자생물학에서 쓰는 효소들의 성질과 사용 방법을 이해하게 된다
2) 여러 가지 vector들을 왜 이용하는지 알게
된다
3) 분자생물학의 주특기인 DNA의 절단과 재조합에 대하여 이해하게 된다